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Ergebnisse

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3.1.2 Untersuchung des ClC-Kb-Gens (ClC-Kb)

3.1.2.1 Allgemeines

In die Untersuchung dieses Gens wurden all die Patienten aus Tabelle 2.1

eingeschlossen, die sich phänotypisch dem klassischen Bartter-Syndrom

zuordnen ließen. Ferner wurden die Patienten untersucht, bei denen entweder

keine Mutation im ROMK-Gen gefunden wurde oder eine eindeutige

phänotypische Zuordnung nicht möglich war.

Aufgrund der hohen Sequenzhomologie von 94% existieren nicht für alle Exone

B-Kanal-spezifische Primer. Lediglich bei den Exonen 1, 2, 4, 9, 14, 16, 17 und

18 konnten Primer gefunden und verwendet werden, die ausschließlich am

entsprechenden Exon des B-Kanals binden. Bei der Untersuchung der anderen

Exone musste der eigentlichen PCR eine Vor-PCR mit dem Ziel vorangestellt

werden, ein B-Kanal-spezifisches Fragment, bestehend aus mehreren Exonen,

zu schaffen. Dazu wurde mit Primerpaaren gearbeitet, die an benachbarten

spezifischen Exonen binden und das zu untersuchende Exon somit flankieren.

So bindet der Vorwärts-Primer am letzten vorangegangenen spezifischen Exon

in 5`-Richtung, der Rückwärts-Primer am nächst folgenden spezifischen

Fragment in 3`-Richtung. Das durch die sich anschließende PCR erlangte

Fragment ist spezifisch für den B-Kanal. Zur Untersuchung des Exons 3 wurden

der Forward-Primer (F) des Exons 2 und der Reverse-Primer (R) des Exons 4

verwendet. Zur spezifischen Darstellung der Exone 5, 6, 7 und 8 diente im

Rahmen der Vor-PCR das Primerpaar 4F und 9R. Um die Exone 10, 11, 12 und

13 zu untersuchen, wurde das Primerpaar 9F und 14R verwendet. In einer

zweiten PCR (Haupt-PCR) wurden die für das zu untersuchende Exon

vorhandenen Primer verwandt, sodass am Ende auch dieses Exon spezifisch

vorhanden war. Eine schematische Darstellung zeigt Abbildung 3.21.

Bei allen Patienten wurde die SSCP-Analyse bei 9°C und 15°C durchgeführt.

Wie schon bei der Untersuchung des ROMK wurden alle Patienten mit einem

auffälligen Bandenmuster sequenziert. Die Basensequenzen der verwendeten

Primer zeigt Tabelle 3.4. Auch die Modifikation der Sequenz-Primer entspricht

der der ROMK-Primer. So tragen auch die ClC-Kb-Primer zusätzlich eine

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