Wolf K45E Manual de usuario descargar pdf (Pagina 35)

Material und Methoden

_____________________________________________________________________________________

Nach Beendigung des Laufes wird das Gel für ca. 15 Minuten in

(WKLGLXPEURPLG  O (WKLGLXPEURPLG DXI  PO 0LOOL4 +

O) gebadet und

anschließend für weitere 15

Minuten unter fließendem

Wasser gespült. Die vom

Ethidiumbromid angefärbten

DNA-Banden fluoreszieren

intensiv orange, da sich

Ethidiumbromid zwischen den

Basenpaaren einlagert

(interkaliert). Daher ist es

wichtig, die basengepaarten

Bereiche während der

Elektrophorese zu erhalten

(native Elektrophorese). Die

DNA-Banden werden nun mit

Hilfe eines Flächenstrahlers

sichtbar gemacht und

dokumentiert (Abbildung 2.2).

Sollte sich auch im Bereich des

mitgeführten Leerwertes eine Bande zeigen, ist die richtige Beurteilung der

PCR wegen einer Kontamination nicht mehr möglich und das Produkt zu

verwerfen.

2.6 SSCP-Analyse

2.6.1 Beschreibung

Die SSCP (Single-Strand Conformation Polymorphism) –Analyse ist ein

Verfahren zum Aufspüren von Mutationen bzw. Polymorphismen in einem zu

untersuchenden DNA-Abschnitt. Als ausreichend sensitive Screening-Methode

BP 1 2 3 K LW

Abbildung 2.2

Agarose-Gel mit aufgetra-

genen PCR-Produkten nach Ethidiumbromid-

färbung. Laufspur 1-3 Pat.-DNA, K: Wildtyp-

Kontrolle, LW: Leerwert (Negativkontrolle), BP:

mit-geführter Standard (100 Base-pair ladder)

1 2 ... 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 ... 130 131

Sin comentarios

Wolf K45E Manual de usuario Pagina 35